样品制备:取1 g样品,至10 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,静置30 min沉淀蛋白,上清液作为待净化液。
层析柱填装:分别称取0.5 g SCX (P/N 04G-4413)和SAX (04G-4414) 填料,依次加入内径1CM的玻璃层析管中,加甲醇5 mL活化,待用。 净化:向活化好的层析管中精密加入待净化液5 mL,收集所有滤出液,用甲醇1 mL清洗滤出液,清洗3次;合并所有的滤出液,蒸干(或氮气吹干),用甲醇溶解并定容至5 mL,摇匀,移至玻璃离心管中,10000转/min离心5 min,上清液作为样品溶液。 色谱条件: 色谱柱:Kinetex PFP 2.6 μ 100×4.6 mm(00D-4477-E0) 流动相:
物质列表:
讨论: 1、由于邻苯二甲酸酯类物质存在于很多塑料制品中,因此,实验全过程应该避免使用塑料材质的实验器材。 2、各类饮料中成分非常复杂,包括各种色素、维生素、蛋白质、和各种食品添加剂。自制层析柱包含强阳离子交换和强阴离子交换,可以除去大多数酸性物质和碱性物质,尽可能多地除去干扰,且不会吸附中性的邻苯二甲酸酯类的目标物。 3、和经典的C18反相柱比较,PFP色谱柱(五氟苯基柱)对结构类似的化合物有更好的选择性,同时芳香选择性使部分极性较大的目标物有更好的保留,减小干扰。 4、17 min处峰为样品杂质。 5、由于标准品的原因(订购的单标没有到货),目前没办法确定各个对应的峰组分,有待进一步实验。本方法可直接转移至LC/MS/MS中,但建议色谱柱规格更换为: Kinetex 2.6μ PFP 100×2.1 mm色谱柱,流速可设置为200-500 μl/min。
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